細(xì)胞名稱(chēng):C2C12 小鼠成肌細(xì)胞

貨號(hào)：WS20012（種屬鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞介紹

這株細(xì)胞是D. Yaffe和O. Saxel建立的小鼠成肌細(xì)胞株的亞克隆(由H. Blau等人構(gòu)建)。C2C12細(xì)胞株可在低血清饑餓下分化，形成可伸縮的肌管并表達(dá)特征性的肌蛋白。如用骨形成蛋白2(BMP-2)處理后，分化途徑從成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)換成成骨細(xì)胞。檢測(cè)表明鼠痘病毒（ectromelia virus，ECTV）陰性。該細(xì)胞復(fù)蘇后不耐受長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸，郵寄后會(huì)有細(xì)胞脫落、壞死等現(xiàn)象，有條件請(qǐng)選用干冰冷鏈快遞或復(fù)蘇后上門(mén)自取。通過(guò)本庫(kù)誘導(dǎo)分化測(cè)試，在2%馬血清刺激下可誘導(dǎo)分化形成肌纖維。

一、細(xì)胞特性

1） 來(lái)源: 組織： 肌肉  品系：C3H

2） 形態(tài)：成肌細(xì)胞  貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10^6 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運(yùn)輸和保存 

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備 

1）準(zhǔn)備DMEM（推薦WS-P-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。        

備注：C2C12細(xì)胞生長(zhǎng)較快，培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞密度不可過(guò)高，否則容易分化,該細(xì)胞復(fù)蘇后不耐受長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸，郵寄后會(huì)有細(xì)胞脫落、壞死等現(xiàn)象，有條件請(qǐng)選用干冰冷鏈快遞或復(fù)蘇后上門(mén)自取。收到郵寄活細(xì)胞的，收集上清離心后收集脫落的懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞一起建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代培養(yǎng)。參考傳代比例：根據(jù)細(xì)胞數(shù)量決定， 細(xì)胞密度應(yīng)控制在 5000 – 15000 活細(xì)胞/平方厘米。傳代周期2-3天，隔天換液。

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)！！??！

1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

2）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒(méi)有特別說(shuō)明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。