細胞名稱:HET-1A 人食管上皮細胞

貨號：WS60246（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞介紹

HET-1A 細胞系于 1986 年通過用由 RSV-LTR 啟動子和編碼猿猴病毒 40 大 T 抗原的序列組成的質(zhì)粒 pRSV-T 轉(zhuǎn)染從人食管尸檢組織中衍生而來。生長因子研究表明，HET-1A 受鈣刺激，受胎牛血清、轉(zhuǎn)化生長因子-β1 和轉(zhuǎn)化生長因子-β2 抑制。伏馬菌素 B1 可抑制 HET-1A 細胞的生長并增加細胞凋亡。合成類視黃醇 CD437（6-[3-(1-金剛烷基)-4-羥基苯基]-2-萘甲酸 (AHPN/CD437)0）通過 caspase-3 依賴途徑誘導(dǎo)食管鱗狀 HET-1A 細胞凋亡。細胞核型位亞二倍體（34-40 條染色體），可用于研究假定的食道致癌物的作用。

一、細胞特性

1） 來源：黑人 男性 25歲 食管

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6 細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備 

1）準備準備BEGM kit培養(yǎng)基  (Lonza/Clonetics，CC-3170)備注：培養(yǎng)基包含（A+B），P/S雙抗，1%。

A： BEBM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基  （貨號CC-3171）       500ML

B:  細胞生長添加劑  （貨號CC-4175）      一套（包含下列試劑）

● BPE, 2.0 ml ● Hydrocortisone, 0.5 ml    ● hEGF, 0.5 ml

● Epinephrine, 0.5ml  ● Insulin,0.5 ml      ● Transferrin, 0.5 ml

● Triiodothyronine, 0.5 ml ● Retinoic Acid, 0.5 ml ● GA, 0.5ml

ATCC 不使用 BEGM 試劑盒提供的 GA-1000（慶大霉素-兩性霉素 B 混合物）。注意：

（1）不要過濾完全培養(yǎng)基。

（2）細胞傳代在使用0.25%胰酶消化后，加入幾倍體積的完全培養(yǎng)液稀釋后（或者加入加入3-4ml用RPMI1640或者DMEM等基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置的含10%FBS）的培養(yǎng)基來終止消化，1000rpm/5min,去除胰酶后再加入細胞完全培養(yǎng)液進行傳代培養(yǎng)。

（3） 細胞傳代后貼壁性不佳，建議使用Corning的cellbind細胞培養(yǎng)瓶(貨號: 3289) 進行細胞培養(yǎng)。

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準?。。。?/span>

1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。培養(yǎng)參考: 細胞消化時間15min左右 (0.25%胰酶)。傳代比例1:2，傳代周期3天左右

2）3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一)如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。