細(xì)胞名稱:NK-92MI 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞

貨號：WS60155（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞介紹

NK-92細(xì)胞是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細(xì)胞株。NK-92MI細(xì)胞是轉(zhuǎn)染得到的源自NK-92細(xì)胞的IL-2非依賴的NK細(xì)胞株。親本細(xì)胞NK-92通過微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化?？赡苡捎谳d體整合到基因組DNA中，轉(zhuǎn)化是穩(wěn)定的。

這株細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細(xì)胞和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標(biāo)記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。

其親本IL-2依賴的細(xì)胞株NK-92細(xì)胞及另一株同樣來源于NK-92細(xì)胞株的IL-2非依賴的細(xì)胞株NK-92CI都可從ATCC得到。NK-92MI細(xì)胞和NK-92CI細(xì)胞這兩個變種都包含、表達(dá)并合成hIL-2cDNA。NK-92MI細(xì)胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而親本細(xì)胞不合成表達(dá)。1998年9月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體，其后代通過BM細(xì)胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后6周，用Hoechst染色、PCR和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)測試進(jìn)行支原體檢測，結(jié)果都呈陰性。

一、細(xì)胞特性

1） 來源：男 50歲 外周血

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，懸浮生長

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備 

1） 準(zhǔn)備MEMα (WS-P-0003)培養(yǎng)基＋0.2mM Inositol（肌醇 iCell-8050）＋0.1mM β-mercaptoethanol(β-巰基乙醇 iCell-8211)＋0.02mM Folic Acid（葉酸iCell-8080）＋12.5% HS(馬血清iCell-002b)+12.5%FBS(iCell-0500)+1%P/S(iCell-15140-122)

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準(zhǔn)?。。?！

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。

（一)如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。