細(xì)胞名稱:MV-4-11 人髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞

貨號：WS60150（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞介紹

MV-4-11細(xì)胞系由Rovera課題組建立，來源于一名患有人雙表型髓性單核細(xì)胞白血病（biphenotypic B myelomonocytic leukemia）的10歲男孩的外周血。Interleukin (IL)-3可以獨立地支持該細(xì)胞長期生長，使用10%FBS培養(yǎng)時則不需要額外添加IL-3。但是，在IL-3和生長因子Granulocyte/Macrophage Colony-Stimulating Factor （GM-CSF）均處于低濃度的情況下，IL-3會抑制MV-4-11細(xì)胞的增殖。

生長因子Granulocyte Colony Stimulating Factor（G-CSF）會協(xié)同GM-CSF促進(jìn)MV-4-11細(xì)胞的增殖，而單獨的G-CSF會短暫刺激該細(xì)胞系。據(jù)文獻(xiàn)[PubMed: 3500218]報道，間接免疫熒光法檢測髓性單核細(xì)胞抗原CD15，超過96%的該細(xì)胞為陽性，40~96%為單核細(xì)胞抗原CD4陽性，4-11%為單核細(xì)胞抗原CD10陽性。

一、細(xì)胞特性

1） 來源：男性，10歲 外周血

2） 形態(tài)：成淋巴細(xì)胞狀，懸浮生長

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備 

1） 準(zhǔn)備IMDM（推薦WS-P-0008）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗1%。

備注：

a) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，傳代時使用【半換液法】對細(xì)胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。如你收到的細(xì)胞為15ML離心管發(fā)貨的細(xì)胞，請不要通過離心的方式收集細(xì)胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。如你收到的細(xì)胞為T25培養(yǎng)瓶發(fā)貨的細(xì)胞，通過離心收集細(xì)胞后，添加8-10ml按照要求配置的新鮮培養(yǎng)液然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。

后續(xù)建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。

b) 細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。

c) 該細(xì)胞對細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時請注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍。細(xì)胞接種密度20萬個/mL ，培養(yǎng)時維持細(xì)胞密度在10萬-100萬個/mL。

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準(zhǔn)?。。?！

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。

（一)如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。