細(xì)胞名稱:MCF-7 人乳腺癌細(xì)胞

貨號(hào)：WS60137（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞介紹

 該細(xì)胞是從一名69歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立的。該細(xì)胞保留了多個(gè)分化乳腺上皮的特性，包括：能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成隆突結(jié)構(gòu)（domes）；該細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)；抗雌激素處理能調(diào)節(jié)細(xì)胞胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白（IGFBP）的分泌。

一、細(xì)胞特性

1） 來源：腺癌，乳腺，胸水

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運(yùn)輸和保存 

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備 

1） 準(zhǔn)備MEM（推薦WS-P-0012）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml 胰島素；雙抗1%。

2） 注意事項(xiàng)：

a. mcf-7 細(xì)胞一般情況下是生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞系，前期呈島狀生長(zhǎng)，隨著細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞會(huì)逐步變成扁平單層細(xì)胞。通常需要6-12天才能達(dá)到80%生長(zhǎng)密度，如果生長(zhǎng)速度比正常情況還要緩慢，可能需要換另外批次的血清，把血清濃度提高到20%也有助于改善細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

b. mcf-7細(xì)胞在復(fù)蘇和傳代后，會(huì)在培養(yǎng)基中觀察到成團(tuán)的細(xì)胞漂浮物，對(duì)于這個(gè)細(xì)胞來說這是正常的情況，在復(fù)蘇和傳代后前三天可以靜置細(xì)胞不做處理，三天后貼壁情況會(huì)有所改善，但懸浮的細(xì)胞團(tuán)仍會(huì)出現(xiàn)，這些懸浮的細(xì)胞是活細(xì)胞在換液和傳代時(shí)需要離心回收，這些懸浮細(xì)胞團(tuán)可以通過使用移液器（5mL或者更?。﹣泶瞪?，重新打入到貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。丟棄這些懸浮細(xì)胞會(huì)使細(xì)胞密度變低，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。

c. 使用0.25% (w/v) Trypsin - 0.53 mM EDTA 消化細(xì)胞。

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準(zhǔn)！?。?！

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。