細(xì)胞名稱:NCI-H2170 人肺癌細(xì)胞

貨號：WS60072（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

支原體檢測：陰性

細(xì)胞介紹

人肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞，從一個患有鱗狀細(xì)胞癌的男性患者的肺部分離。組織捐贈者是一個不吸煙的人。

一、細(xì)胞特性

1） 來源：男性  肺

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運(yùn)輸和保存 

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備 

1）  準(zhǔn)備1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 (推薦WS-P-0001),87%;優(yōu)質(zhì)胎牛清，10%；P/S青霉素-鏈霉素，1%。                                                                         

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準(zhǔn)?。。。?/span>
a)該細(xì)胞貼壁生長，初期為上皮樣細(xì)胞的團(tuán)簇，隨著細(xì)胞的增殖，細(xì)胞團(tuán)簇會慢慢融合并形成單層細(xì)胞。
b)該細(xì)胞復(fù)蘇后初始活力很低，狀態(tài)恢復(fù)較慢，是正?，F(xiàn)象，請耐心培養(yǎng)，正常換液。
c)復(fù)蘇和傳代初期會有一些中度到重度的細(xì)胞和碎片懸浮物出現(xiàn)，日常培養(yǎng)中也總會有一些漂浮的細(xì)胞和一些碎片存在，是正?，F(xiàn)象。建議不要丟棄這些漂浮的細(xì)胞，因?yàn)樗鼈兛赡苋匀痪哂谢盍?。請保留漂浮的?xì)胞，將它們離心后再加入到原始培養(yǎng)瓶中，以增加細(xì)胞密度，幫助細(xì)胞更好更快的增殖，否則可能會由于細(xì)胞密度過低導(dǎo)致生長緩慢或停止。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。