常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天應(yīng)該怎么處理？

1. 收到常溫細(xì)胞后，請(qǐng)立即拍照記錄包裝是否完好、有無(wú)漏液或瓶身破損。

2. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否存在微生物污染，并拍攝不同倍數(shù)下的細(xì)胞狀態(tài)及染菌情況，以便后續(xù)售后處理。

3. 消毒瓶身后，更換為贈(zèng)送的完全培養(yǎng)基，隨后放入培養(yǎng)箱靜置2–3小時(shí)。如發(fā)現(xiàn)較多細(xì)胞懸浮，需離心收集并重新接種至培養(yǎng)瓶。

4. 觀察細(xì)胞密度：

   · 若密度超過(guò)80%，可進(jìn)行正常傳代處理（部分原代細(xì)胞不可傳代，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況判斷）。首次傳代推薦比例為1:2至1:3（具體比例視實(shí)際細(xì)胞密度而定，如不確定請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持）。

   · 若密度未達(dá)80%，可繼續(xù)培養(yǎng)，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細(xì)胞需離心全部培養(yǎng)基以收集細(xì)胞。

5. 如因氣溫或運(yùn)輸?shù)仍驅(qū)е沦N壁細(xì)胞漂浮，請(qǐng)離心收集細(xì)胞后，在離心管中進(jìn)行消化傳代（參考附件），或及時(shí)聯(lián)系技術(shù)支持獲取指導(dǎo)。

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貼壁細(xì)胞傳代步驟

1. 吸棄原有細(xì)胞培養(yǎng)基。

2. 沿貼壁細(xì)胞層對(duì)側(cè)加入沖洗液，避免擾動(dòng)細(xì)胞層，輕輕搖晃容器數(shù)次。

3. 吸棄沖洗液，加入預(yù)熱的胰酶（例如T25培養(yǎng)瓶加入1ml），確保胰酶覆蓋細(xì)胞層。

4. 室溫孵育約2分鐘（具體時(shí)間因細(xì)胞系而異）。

5. 顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況，若未達(dá)90%可適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間，每30秒檢查一次。

6. 當(dāng)細(xì)胞解離程度≥90%時(shí)，傾斜容器使液體流盡，加入兩倍體積預(yù)熱的完全培養(yǎng)基，吹打細(xì)胞層表面使細(xì)胞分散。

7. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15mL無(wú)菌離心管，以200×g離心3–5分鐘（具體參數(shù)視細(xì)胞種類調(diào)整）。

8. 用少量預(yù)熱完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，按推薦比例稀釋后接種至新培養(yǎng)容器，并放入培養(yǎng)箱。如使用普通培養(yǎng)瓶，需旋松瓶蓋以保證氣體交換（透氣瓶蓋除外）。

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懸浮細(xì)胞傳代步驟

1. 收集T25培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液至離心管，1000rpm離心5分鐘。

2. 棄上清，加入1–2ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

3. 按1:2比例傳代至新T25培養(yǎng)瓶，并補(bǔ)充5–8ml新鮮完全培養(yǎng)基。

4. 將培養(yǎng)瓶放入細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。